qPCR检测

• SNP检测

  SNP/单核苷酸多态性分析       SNP(Single Nucleotide Polymorphism)，即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态。一般来说，一个SNP位点只有两种等位基因，因此又叫双等位基因。SNP在人类基因组中的发生频率比较高，大约平均每1000个碱基中就有一个多态位点。有些SNP位点还会影响基因的功能，导致生物性状改变甚至致病。单核苷酸多态性是研究人类家族和动植物品系遗传变异的重要依据，因此被广泛用于群体遗传学研究(如生物的起源、进化及迁移等方面)和疾病相关基因的研究，在药物基因组学、诊断学和生物医学研究中起重要作用。 服务项目1. TaqMan探针法       针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针，进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时，该探针与模板退火，即产生了适合于核酸外切酶活性的底物，从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来，破坏两荧光分子间的PRET，发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。2. SNaPshot法       该技术由美国应用生物公司（ABI）开发，...
• qPCR检测

  实时荧光定量PCR检测实验原理        实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针，利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程，最后通过内参对照计算目的基因表达差异分析或通过标准曲线对未知模板进行定量分析，具有操作简便、快速高效、高通量、高敏感性等特点。实验流程 SYBR GREEN 法和 TaqMan 探针法的区别方法优点缺点应用SYBR GREEN 法方便快捷，不必针对各个基因设计合成TaqMan探针，具有价格优势。无模板特异性，对引物特异性要求较高，需进行熔解曲线分析；灵敏度相对较低。应用于基因的差异表达分析，比如RNA干扰效果确认。TaqMan 探针法荧光化合物标记到特异性的寡核苷酸上，具有高度特异性，重复性好，荧光信号强。只适合一个特定的目标，探针价格较高。通常应用于基因拷贝数的确定，在临床诊断中常用，比如病毒和病原菌定量检测。 技术应用 定量方法原理技术应用绝对定量(Absolute Quantification，AQ)是测定目的基因在样本中的分子数目，即通常所说的拷贝数。病原体检测；转基因食品检测；基因表达研究。相对定量(Relative Quantification，RQ)测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例，而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。基...
• Western Blot检测

  Western blot        免疫印迹（immunblotting）又称蛋白质印迹（western blot）,他是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹（western blot）具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现在已成为蛋白分选的一种常规技术。免疫印迹（western blot）常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分选。western blot一般步骤：蛋白质抽提，蛋白质定量，变性聚丙稀酰胺不连续凝胶电泳（SDS-PAGE），蛋白质转移，western blot膜的封闭和抗体孵育，western blot结果检测，western blot数据分析，提供实验报告。western blot服务内容：专业的队伍，提供完整的实验步骤和结果，提供专业的数据分析，提供电子版扫膜结果，以及灰度值分析。 服务提示1 客户可提供目标蛋白一抗，或者由HTHealth代购。 2. HTHealth可免费提取蛋白、提供二抗、免费的内参，如GAPDH，β-actin，LaminB等。 3. 我们将保留原始胶片及实验报告。
• 蛋白质谱鉴定

  液质联用技术HPLC-MS/MS        利用LC-MS/MS蛋白鉴定技术对胶条样本（即SDS-PAGE样本）、IP、co-IP、Pull-down等纯化溶液中等复杂样本进行蛋白鉴定。 技术原理        HPLC-MS/MS又叫高效液相色谱-质谱联用技术，它以液相色谱作为分离技术，质谱作为检测系统。样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后经过质谱仪质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器的到质谱图，液质联用体现了色谱和质谱的优势互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与MS具有高选择性、高灵敏性及能够提供相对分子质量与结果信息的优点结合起来，在药物分析、食品分析和环境分析等许多领域的到了较多的应用。技术路线 仪器类型 Thermo-Scientific Q Exactive  应用范围 相互作用蛋白复合体或多肽的鉴定 技术优势 适合复杂样品的蛋白鉴定，如相互作用洗脱的蛋白混合液、胶条等 周期短，通量高  样品要求 1.双向凝胶胶点：考染、银染（质谱兼容）点清晰可见 2.SDS-PAGE条带：考染、银染（质谱兼容）点清晰可见 3.蛋白质溶液...
• 病毒包装

  siRNA产品技术概述RNA干扰（RNA interfering，RNAi）现象是由与靶基因序列同源的双链RNA引发的广泛存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程。 由于RNAi具有高度的序列专一性，可以特异地将特定的基因沉默，从而获得基因基因功能丧失或基因表达量的降低。因此可以作为功能基因组学研究的一种有力的工具。RNAi技术可以应用到包括功能学，药物靶点筛选，细胞信号传导通路分析，疾病治疗等。    成功的RNAi实验设计是您实验成功的前提。专业的设计人员凭借多年的设计经验为您提供完整的RNAi实验设计服务和优化的siRNA，shRNA以及RNAi检测的探针和引物的设计服务。完善的实验设计，精准的靶标以及引物设计使您的实验节省人力和物力。 客户需提供 1、客户提供干扰序列：需要提供RNA干扰的目的基因的名称（或Gene Bank号）、序列，并与我们共同讨论实验方案；2、客户不提供干扰序列：由我们代为设计三条siRNA干扰序列。  质量保证 1、客户提供的干扰序列我们只负责构建及测序正确；2、由HTHealth代为设计的三条干扰序列，保证其中一条干扰效率不低于70%。 RNAi产品承诺 我们承诺3个RNAi产品中至少有一个有效RNAi产品，如果未...